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首页>技术与应用>应用数据库

肉制品胭脂红着色剂的测定

发布时间:2014-12-31        内容来源:月旭科技

1、适用范围

    适用于肉制品中胭脂红着色剂的测定。
2、提取步骤

试剂的配置:

1)硫酸溶液:1+9体积比;

2)钨酸钠溶液:C=100g/L;

3)无水乙醇+氨水+水=7+2+1;

4)柠檬酸溶液:C=200g/L;

4)pH=5的水,取100mL的水,用柠檬酸溶液调节至pH值=5.

提取过程:
    
称取试样10 g,均质器均质1min,然后加入20 mL石油醚提取脂肪,超声5 min,静止沉降2 min后弃去石油醚,重复3次。吹干后加入10 mL提取液(无水乙醇+氨水+水=7+2+1)提取胭脂红,边搅拌边过滤(用30mL带筛板的固相萃取空柱管进行过滤),重复提取3-5次,收集全部的提取液。70 oC水浴旋蒸至10mL以下,加入1mL硫酸溶液和1mL钨酸钠溶液,继续70o


注意:1)提取胭脂红需多次提取,确保提取完全;

2)提取胭脂红的过程中不能用滤纸过滤,因为滤纸会极大程度的吸附胭脂红色素;

      3)本解决方案创新性的以SPE空柱管作为过滤提取后的肉制品的装置,相比其他的过滤装置更为高效;

      4)提取胭脂红后所得的样品溶液,加入硫酸溶液和钨酸钠溶液沉淀蛋白后,需要用纯水洗涤蛋白残渣,这样可以有效的提取吸附在蛋白残渣中的胭脂红;

      5)本实验的加标回收率是将肉制品去除脂肪后,再加入胭脂红进行加标回收率实验。

3、聚酰胺SPE柱净化步骤净化:

SPE柱:Welchrom®PA(1g/6mL)

活化:6mL纯水;

上样:将提取步骤处理好的样品溶液过Welchrom®聚酰胺固相萃取柱,弃去上样流出液;

淋洗:6mL pH=5的水,6mL甲醇+加酸(6+4),12mL纯水洗至中性;

洗脱:6mL无水乙醇+氨水+水(7+2+1),收集洗脱液。

浓缩:将收集的洗脱液旋蒸至近干,加水定容至10ml,过水膜上机测定。

标样配置:1 mg./ml胭脂红标准溶液,取50 µl并用水定容至10 mL

注:浓缩后的溶液应用水系滤膜过滤,不能用有机系滤膜,因为有机系滤膜容易吸附胭脂红,从而损失回收率。 
4、色谱条件:
色谱柱:月旭Ultimtae®XB-C18,4.6×150,5µm;

流动相:甲醇:0.02 mM乙酸铵溶液,梯度洗脱;

流速:1.0 mL/min;

柱温:30 oC

检测波长:254 nm;

进样量:20 µL
表1:液相色谱梯度洗脱条件

时间/min

甲醇/%

0.02mM乙酸铵溶液/%

0

22

78

5

35

65

20

85

15

21

22

78

25

22

78

5.色谱图或者加标回收率结果

 
图1:肉质品样品提取和净化胭脂红的过程


图2:胭脂红标准样品色谱图(浓度:5.0 µg/mL)

图3:肉制品样品色谱图

图4:肉制品样品加标色谱图(加标浓度:5 mg/kg)


图5:胭脂红标准样品色谱图(浓度:1.0 µg/mL)

 

图6:肉质品样品色谱图

图7:肉制品样品加标色谱图(加标浓度:1mg/kg)

胭脂红加标回收率结果

样品名称

原始含量(mg/kg)

加标含量(mg/kg)

回收率(%)

1

-

5.0

92.5%,91.8%,96.7%

2

-

1.0

93.7%,85.4%,87.8%

 

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