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蔬菜水果中维生素K1的检测(GB 5009.158-2016)

发布时间:2018-08-16        内容来源:月旭科技

维生素K1在天然绿色植物中广泛存在的一种脂溶性维生素,是肝脏合成因子Ⅱ、Ⅶ、Ⅸ、Ⅹ所必须的物质。缺乏维生素K1引起出血性疾病。因此要多吃蔬菜水果哦!


下面看看月旭科技对食品中的维生素K1的检测过程及结果。

 

1、适用范围及原理

水果、蔬菜等低脂性植物样品,用异丙醇和正己烷提取其中的维生素 K1,经维生素K1前处理小柱净化,去除叶绿素等干扰物质。用 C18 液相色谱柱将维生素K1 与其他杂质分离,锌柱柱后还原,荧光检测器检测,外标法定量。(本实验选用菠菜和苹果)


参考标准:《GB 5009.158-2016 食品安全国家标准 食品中维生素K1的测定》


2、溶液的配置

维生素K1标准贮备溶液(1mg/mL):精确称取 50mg(精确至0.1mg)维生素K1标准品于50mL容量瓶中,用甲醇溶解并定容至刻度。将溶液转移至棕色玻璃容器中。在-20℃下避光保存,保存期2个月。

维生素K1标准中间液(100μg/mL):准确吸取标准贮备溶液10.00m于100mL容量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀。将溶液转移至棕色玻璃容器中,在-20℃下避光保存,保存期2个月。

维生素K1标准使用液(1.00μg/mL):准确吸取标准中间液1.00mL于100mL容量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀。

正己烷-乙酸乙酯混合液( 90+10 ):量取 90mL正己烷,加入 10mL 乙酸乙酯,混匀

流动相:量取甲醇 900mL ,四氢呋喃 100mL ,冰乙酸 0.3mL ,混匀后,加入氯化锌 1.5g ,无水乙

酸钠 0.5g ,超声溶解后,用 0.22 μ m 有机系滤膜过滤。


3、提取步骤

精确称取5g经均质匀浆的样品于50mL离心管中,加入5mL异丙醇,旋涡1min,超声5min,再加入10mL正己烷,旋涡震荡提取3min,6000r/min离心5min,移取上清液至25mL棕色容量瓶中,向下层溶液中加入10mL正己烷,重复提取1次,合并上清液于上述容量瓶中,正己烷定容至刻度。用移液管准确移取上清液5mL至15mL离心管中,氮气轻吹至干,加入1mL正己烷溶解,待净化。


4、SPE净化步骤

SPE柱:月旭Welchrom®维生素K1前处理小柱,规格:2g/6mL。

活化:5mL正己烷,弃去

上样:待净化液全部上样,弃去

淋洗:5mL正己烷淋洗,弃去

洗脱:15mL正己烷-乙酸乙酯混合液洗脱,收集50mL离心管中,抽干

氮吹至近干,用甲醇定容至5mL,并过0.22 µm滤膜,上HPLC检测。


5、色谱条件

色谱柱:月旭Ultimate® XB-C18  4.6×250mm,5μm

Ultimate® Zn  4.6×50mm

流动相:甲醇 900mL ,四氢呋喃 100mL ,冰乙酸 0.3mL ,混匀后,加入氯化锌 1.5g ,无水乙

酸钠 0.5g

流速:1.0mL/min

柱温:30℃

进样量:10μL
检测波长:激发波长为243nm,发射波长为430nm

 

6、色谱图或者加标回收率结果

图1.维生素K1对照10ng/mL

图2.苹果样+标0.05μg/g

3.苹果原样

图4.菠菜样+标1μg/g

5.菠菜原样

表1:加标回收率


7、相关产品信息

 

下 载

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