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小麦粉中赭曲霉毒素 A 的测定

发布时间:2018-06-04        内容来源:月旭科技

赭曲霉毒素是继黄曲霉毒素后又一个引起世界广泛关注的霉菌毒素。现已发现有 7 种曲霉和 6 种青霉菌能产生赭曲霉毒素 A。该毒素主要污染粮谷类农产品如燕麦、大麦、小麦、玉米、动物饲料和动物性食品(如猪肾脏、肝脏)等。赭曲霉毒素主要侵害动物肝脏与肾脏。这种毒素主要是引起肾脏损伤,大量的毒素也可能引起动物的肠黏膜炎症和坏死。还在动物试验中观察到它的致畸作用。其中,赭曲霉毒素的毒性强弱顺序是:OTA>OTC>OTB,本实验主要针对小麦粉中赭曲霉毒素 A 的测定。

参考标准:

《GB 5009.96-2016 食品安全国家标准 食品中赭曲霉毒素 A 的测定》第一法 

实验步骤: 

甲醇-水(80:20):80mL 甲醇+20mL 水,混匀 

磷酸缓冲溶液:称取 8.0g 氯化钠,1.2g 磷酸氢钠,0.2g 磷酸二氢钾,0.2g 氯化钾溶解于约 990mL 水中,用浓盐酸调节 pH 至 7.0,用水稀释至 1L 

(1)样品提取: 

称取 5g 小麦 粉试样于 50mL 离心 管中,加 20mL 甲醇 水(80:20)混 合溶液, 震 荡30min,8000r/min 离心 3min, 移去 10mL 上清液,加入磷酸缓冲溶液 40mL,经过 8000r/min离心 3min 备用。 

(2)样品净化: 

活化:将赭曲霉毒素 A 免疫亲和柱放置到室温,然后接上注射器 

上样:将上述提取液全部转移到注射器上,以 1 滴/s 的速度通过免疫亲和柱,弃流出液 

淋洗:先用 10mL 磷酸缓冲溶液淋洗,再用 10mL 水淋洗,然后将小柱抽干 

洗脱:准确加入 1mL 甲醇洗脱至进样瓶中,抽干,待 HPLC 分析。 

(3)仪器条件: 

HPLC 条件 

色谱柱:Welch Ultimate AQ-C18 4.6×150mm,5µm 

仪器型号:waters2695+FLR2475 

流动相:A:2%冰乙酸水溶液 B:乙腈 

等度洗脱:A:B(50:50)柱温:35℃ 

流速:1.0mL/min 

检测波长:激发波长 333nm 

发射波长 460nm 

进样体积:10μL

(4)实验图谱及结果

图 1 赭曲霉毒素 A 样品加标 1µg/kg 液相色谱图 

Fig 1 liquid chromatogram ofOchratoxin A samples at 1.0μg/kg 

由图 1 可看出经赭曲霉毒素 A 免疫亲和柱净化,采用月旭 Xtimate C18 色谱柱检测峰形良好,保留时间稳定。

图 2 赭曲霉毒素 A 样品加标 2µg/kg 液相色谱色谱图 

Fig 2 liquid chromatogram ofOchratoxin A samples at2.0μg/kg

由表 1 可知,采用免疫亲和柱结合液相色谱法检测赭曲霉毒素 A,加标量为 1μg/kg 和 2.0μg/kg 的样品进行了检测,回收率在 85.33%~101.94%,能够满足检测要求。

(5)实际样品检测: 

为了保证小麦粉样品的代表性,从大润发、永辉、华联、家乐福、苏果、沃尔玛等超市以及菜场选择具有代表性的 10 个小麦粉样品进行检测,结果均为未检出。 

(6)结论 

本实验建立了赭曲霉毒素 A 检测的 HPLC 检测方法,对于加标量为 1.0 和 2.0μg/kg 的样品进行了检测,回收率在 85.33%~101.94%,符合国标要求,免疫亲和柱方法稳定并且色谱柱重现性良好,说明本方法能够用于检测食品中的赭曲霉毒素 A 的含量。 

(7)订购指南


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